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UPLC

超高效液相色譜(Ultra Performance Liquid Chromatography,UPLC)

  色譜理論認(rèn)為提高色譜柱的效能(efficiency)就能增加儀器的解析度(resolution),而運(yùn)用粒徑低于2μm的小顆粒無疑是增加效能的好方法。但減小固定相的粒度以增加色譜柱效能一直是色譜儀器科學(xué)的瓶頸,因?yàn)樾☆w粒不僅要求系統(tǒng)能承受高于目前極限壓力(比如6000psi/400bar),需要更小的系統(tǒng)體積(死體積),并且需要能適應(yīng)可能只有幾秒峰寬的高速檢測器。

  與傳統(tǒng)的高效液相色譜(HPLC)相比,UPLC具有以下優(yōu)勢:

  1.高分離度(ultra resolution)

  根據(jù)液相色譜分離的解析度方程,解析度正比于柱效能的平方根

  而根據(jù)范迪姆特(Van Deemter)色譜理論,柱效反比于系統(tǒng)固定相粒度大小。UPLC系統(tǒng)運(yùn)用的固定相粒度能達(dá)到1.7μm,根據(jù)上述方程,該系統(tǒng)達(dá)到的效能將比5μm粒度系統(tǒng)高70%,而比3.5μm高40%。

  2. 高速度(ultra speed)

  在保證得到同樣質(zhì)量數(shù)據(jù)的前提下,UPLC能提供單位時(shí)間內(nèi)更多的信息量。在不影響解析度的的情況下,小粒度能提供更高的分析速度,同樣也能使柱長減少,根據(jù)Van Deemter色譜理論,最優(yōu)流速反比于粒度大小。

  例如,運(yùn)用1.7μm的顆粒,相對于5μm顆粒,在不影響柱效的情況下,柱長將可以立方級的減少,而且可以在3倍的流速下運(yùn)行,相同的解析度情況下,分離速度提高了9倍。

  3. 靈敏度(sensitivity)

  過去對于提高靈敏度的研究大都集中于檢測器上,不論是光學(xué)檢測器還是質(zhì)量檢測器。但是,其實(shí)運(yùn)用UPLC也能提高分析的靈敏度。

  UPLC能提高柱效N,從而使峰寬w變的更窄,而峰高卻增加了,同時(shí),由于UPLC運(yùn)用了更短的柱子(柱長L更?。?,進(jìn)一步增加了峰高。因此,在提高柱效的同時(shí),運(yùn)用1.7μm的UPLC系統(tǒng)比5μm和3.5μm的系統(tǒng)靈敏度分別提高了70%和40%,而在柱效下相同情況下,能分別提供3倍和2倍的靈敏度。


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